HJ 1215-2021 水质 浮游植物的测定 滤膜-显微镜计数法.pdf

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  • HJ 1215-2021  水质 浮游植物的测定 滤膜-显微镜计数法

    按照GB/T14581、HJ/T91和HJ494的相关规定米集定量样品。 使用采水器(6.3)采集1L~2L样品至定量采样瓶(6.4)中。若水体透明度较高,浮游植物数 量较少时,应酌情增加采样体积。定量样品采集完成后,定量采样瓶(6.4)不应装满,以便摇匀。 注1:有些浮游植物(如蓝藻)常上浮在水面或成片、条带分布,可在此水华密集区域采样作为峰值参考 注2:定量样品采集应在定性样品采集之前。应保持固定时间段采样,以便结果之间可相互比较

    定性样品采集后应立即加入鲁哥氏碘液(5.4)固定,用量为水样体积的1.0%~1.5%。镜检活 不加鲁哥氏碘液(5.4)固定。定性样品在室温避光条件下可保存3周;1℃~5℃冷藏避光条 保存12个月。活体样品4℃~10℃冷藏避光条件下可保存36h。

    定量样品采集后立即加入鲁哥氏碘液(5.4)固定,用量为水样体积的1.0%~1.5%。也可将鲁哥 天碘液(5.4)提前加入定量采样瓶(6.4)中带至现场使用。定量样品在室温避光条件下可保存3周; 1℃~5℃冷藏避光条件下可保存12个月。 样品在保存过程中,应每周检查鲁哥氏碘液(5.4)的氧化程度,若样品颜色变浅,应向样品中补 加适量的鲁哥氏碘液(5.4),直到样品的颜色恢复为黄褐色, 注:若样品需长期保存,应加入甲醛溶液(5.3),用量为水样体积的4%

    按照8.1.2~8.1.5的要求完成预检装片,判断样品浮游植物密度,便于样品的后续分析。

    剪力墙标准规范范本8. 1. 2 混匀样品

    根据预检估算浮游植物密度,调整样品过滤体积,最终使滤膜上约有40个~105个浮游植物细 不同预检估计密度水平下推荐的样品过滤体积见表1。

    表1推荐选用的样品过滤体积

    用量筒或移液器(6.16)快速量取适量样品体积,将样品加入装有滤膜(5.6)的真空抽滤装置(6.6) 漏斗中,静置2min~3min,真空抽滤,至漏斗中有0.5cm液层时关闭真空泵,使剩余液体完全通过漏 斗,切忌抽干滤膜。

    8. 1. 5 装片制备

    样品过滤完成后,用无齿组织镊子(6.9)取下滤膜,保持截留浮游植物的一面向上,放在滴有1 改镜浸没油(5.5)的载玻片(6.7)上,再用透明玻璃滴棒在滤膜上滴2滴显微镜浸没油(5.5),半 (6.7)放入载玻片晾片板(6.10),置于烘箱(6.11)中,70℃土2℃加热2h。2h后取出载理 板(6.10),观察滤膜是否透明。若已透明,再在滤膜上滴加2滴显微镜浸没油(5.5),盖上盖现

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    ),装片制备完成。若滤膜加热2h后未透明,延长加热时间,不超过24h。盖上盖玻片(6.8)日 尤动滤膜。

    在显微镜(6.12)下观察定性样品,鉴定浮游植物的种类。优势种类鉴定到种,其他种类至少应鉴 定到属。部分鉴定参考资料见参考文献。 注:种类鉴定除用定性样品观察外,还可吸取已完成计数的定量样品进行观察

    计数前标定显微镜(6.12),确定计数视野面积(Whipple视野或目镜视场视野)。显微镜标定 舌载物台测微计(6.13)和惠普尔目镜分划板(6.14)。惠普尔目镜分划板标定方法参见附录B。

    8. 3.2显微镜计数

    不同密度水平样品推荐视野类别及计数视野数量见表2。将装片(8.1.5)置于显微镜(6.12)载物 台上,用Whipple视野或目镜视场视野进行镜检计数。较低密度水平样品计数,建议选择目镜视场视野 十数。根据浮游植物细胞大小,选择目镜10×、物镜20×或目镜10×、物镜40×放大倍数镜检,记录 每个视野的浮游植物种类及数量

    不同密度水平样品推荐视野类别及计数视野数

    Whipple视野计数规则:视野中处于 线的藻类计入总数,处于上边界及左边界线的 藻类不计入总数,如图1。若出现丝状体等较大个体显著穿过两个或多个格子的边界时,应在低倍镜下 单独计数,再计入总数。破损细胞不计数。丝状体或似球形群体细胞数估算参见附录C。计数时宜缓慢 多动显微镜载物台,应避免在一个区域重复抽样,确保滤膜上、下、左、右和申部区域的视野均有抽样。 显微镜视野在滤膜上的移动方向如图2所示,

    图1Whipple视野计数约定规则示意图

    样品中浮游植物的细胞密度按照公式(1)计算。

    式中:N—样品中浮游植物的细胞密度,cells/L Af—滤膜有效过滤面积,mm; A—计数面积(镜检计数的视野面积之和),mm; 显微镜观察计数的浮游植物细胞数,cells; Vo—过滤样品的取样体积,ml; 1000一一体积单位换算系数,ml/L

    测定结果以科学计数法表示,保留2位有效数字。

    图2显微镜视野在滤膜上的移动示意图

    ×1000 4 Vo

    6家实验室分别对含高密度水平(1.0×10°cells/L)、中密度水平(4.0×10°cells/L)和低密度水 平(7.0×104cells/L)的浮游植物样品进行了6次重复测定:实验室内相对标准偏差分别为0.18%~ 0.64%,0.22%~0.49%,0.37%1.16%;实验室间相对标准偏差分别为:0.28%、0.68%、1.57%。计 算精密度所用数据均经以10为底进行对数转换。高、中、低密度验证样品的实验室间95%置信区间 见表3。

    中、低密度水平验证样品的实验室间95%置信区

    11质量保证和质量控制

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    11.1最小计数量:优势种种类计数最少100个~150个。 11.2每批次样品中,随机抽取10%的样品做平行测定,用计数差异百分比(percentdifferencein enumeration,PDE)评估数据的精密度。按照公式(2)计算PDE

    式中:PDE一一计数差异百分比,%; Ni—平行样1测定结果的均值,cells/L; Nz—平行样2测定结果的均值,cells/L。 11.3定期标定显微镜,标定目镜分划板及视野面积,每年至少1次。

    中:PDE二计数差异百分比,%: Ni—平行样1测定结果的均值,cells/L; N2—平行样2测定结果的均值,cells/L。 3定期标定显微镜,标定目镜分划板及视野面积,每年至少1次

    实验中产生的废液应分类收集,集中保管,依法委托有资质的单位进行处理。

    附录A (规范性附录) 方法检出限计算方法

    方法检出限计算方法 附录A给出了方法检出限的计算方法。方法检出限与计数视野数、可计数视野总数及子样本体积 有关。假设样品在滤膜上符合随机分布,

    MDL= Ne ×ln0.01 nexVo

    B. 1. 1 载物台测微计

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    载物台测微计(6.13)如图B.1所示,是一块特制的载玻片,其中央有一个小圆圈。圈内刻有分度, 将长度为1mm的直线等分为100个小格,每个小格长度等于10um。

    B.1.2惠普尔目镜分划板

    图B.1载物台测微计示意图

    惠普尔目镜分划板(6.14)如图B.2所示,是一种网格型目镜分划板,外观为刻有方格的玻璃圆盘, 包含1个大格,大格被等分成100个中格,中心位置的1个中格又被等分为25个小格。标定惠普尔目 镜分划板,以计算不同放大倍数下的Whipple视野面积。使用载物台测微计(6.13)标定惠普尔目镜分 划板。载物台测微计规格为1mm,均分成100等分,每小格代表10um。

    图B.2惠普尔目镜分划板示意图

    B.2惠普尔目镜分划板标定步骤

    B.2.1将惠普尔目镜分划板(6.14)刻度向下装入目镜隔板上。 B.2.2将载物台测微计(6.13)放在显微镜载物台上,刻度朝上。先用低倍镜对焦,使视野中载物台 测微计标尺刻度清晰。 B.2.3转动目镜,使惠普尔目镜分划板标尺与载物台测微计标尺刻度平行,移动载物台使载物台测微 计标尺与惠普尔目镜分划板标尺重叠,再使两尺的“0”刻度完全重合。定位后,查找确定两尺第2个 完全重合的刻度,计数两组重合刻度之间惠普尔目镜分划板的格数Nw和载物台测微计标尺的格数Ns, 如图B.3所示。载物台测微计每格长度10um,在一定放大倍数下,惠普尔目镜分划板的标定结果即是 每格的长度。

    式中:L—惠普尔目镜分划板的中格边长,μum; Ls—载物台测微计标尺上单格的长度,um; Ns一两组重合刻度线之间载物台测微计标尺的格数; Nw—两组重合刻度线之间惠普尔目镜分划板上中格的格数 将计算数据填入表B.1。依据表B.1完成表B.2。

    图B.3载物台测微计标定惠普尔目镜分划板

    图B.3载物台测微计标定惠普尔目镜分划板示意图

    Le=Ls × A Ns

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    电气标准规范范本表B.1惠普尔目镜分划板标定结果

    表B.2惠普尔目镜分划板面积计算结果

    式中:NT—丝状体总细胞数,cells; Nt——丝状体平均细胞数,cells/个; 一丝状体数目,个。 若呈偏态分布,按照公式(C2)计算丝状体总细胞数量

    式中:NT 一丝状体总细胞数,cells; M——丝状体平均细胞数中位值,cells/个; 丝状体数目,个。

    C.2似球形群体细胞数估算

    附录C (资料性附录) 丝状体、似球形群体浮游植物细胞数量估算

    log1o N.=2.99 logio de 2

    式中:N似球形群体细胞数,cells; 2.99一一线性回归方程的斜率; de平均群体直径,um; 2.80一一线性回归方程的截距。 使用该公式估算微囊藻群体细胞数时,测量似球形群体体积应忽略群体的表层胶被,群体直径为充 满细胞部分的直径;将非球形群体视为圆柱体、卵圆体估算群体体积;应随机测量至少30个群体,以 获得合理的群体平均体积,平均群体直径为等同于群体平均体积的似球形群体的直径。 特别大的群体,可通过目镜分划板对大群体的一小部分面积进行细胞计数,然后估算整个群体面积 总细胞数混凝土标准规范范本,并在工作记录表上加以说明

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