实时FQ—PCR在解脲支原体感染实验室诊断中应用的研究.pdf

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  • 图1Uu阳性曲线和Uu阴性曲线 fig.1 Uu postive curve and Uu negtive curve 1 Negative Curve;2PositiveCurve;3Positive Curve

    4.3.3PE5700型PCR扩增仪荧光曲线的含义及标准曲线的调节方法 Rn值:也称标准化的报告值,代表在PCR反应过程中所检测到的荧 光信号水平。Rn值是通过将报告染料的信号除以空白对照的基线平均值 计算得到的。在PCR过程中,Rn值随着靶核酸的扩增而增长;直至反应 达到平台期。 CT值:也称循环值,代表在PCR循环过程中,最先检测到高于基 线水平的荧光信号增长时所对应的循环数。 将参数start和stop的值分别设置为A、B(0

    图2Uu标准品的Rn对循环数的动力学曲线 fig.2Rn VS Cycles of Uu Standard Reagent

    玩具标准110°基因拷贝/L 210基因拷贝/μL 310°基因拷贝/L 410°基因拷贝/uL 510°基因拷贝/uL 6 基线

    标准品的线性方程如下:

    之前进行选择。对于我们的试剂一般选在2~8之间。具体步骤如下: 将基线调节参数先设置为00。观察各原始曲线,选择较为平坦的 部分制定A、B值。重新输入参数A、B,分析。 阀值线的选择 阀值线与荧光曲线的交点即为CT值。只有在设置阈值线后,才能利 用标准品的CT值得出标准曲线。阅值线的选择应尽量保证其与所有阳性 标本的对数增长期前段有一交点,而使所有的阴性曲线都在阀值线下。在 某些阴性曲线有非特异性波动而与阀值线有相交时,应通过单个分析,判 别其阴阳性。在某些弱阳性曲线有荧光信号极度下降时,其与阀值线不能 相交,此时也应单独分析,判别阴阳性,

    5.1液体培养操作程序

    5.2Uu培养法结果判读

    >104,桔黄色为阴性。Mh的半定量结果判读同Uu。

    16例临床标本培养后49例呈阳性结果,见表2。

    表2116例标本Uu培养结果 2The results of Uu in 116 specimens by cu

    图4支原体包囊 fig.4 Cystof Mycopiasm

    借此论文完成之际谨向三年来辛勤培养我的导师张文卿教授致以衷 心的感谢,感谢导师的淳淳教海和精心指导,导师严谨的治学态度和一丝 不苟的求实精神将使我受益终身。 感谢王斌教授、于红教授、强新教授、罗兵教授在试验完成过程中给 与的热情帮助和指导。 感谢广州达安基因有限公司的李振华朋友、泰安市中心医院的李莉莉 老师、郭辉主任在论文完成的过程中给与的无私帮助。 感谢我的爱人谢天自给与的支持和理解,

    借此论文完成之际谨向三年来辛勤培养我的导师张文卿教授致以衷 心的感谢,感谢导师的淳淳教海和精心指导,导师严谨的治学态度和一丝 不苟的求实精神将使我受益终身。 感谢王斌教授、于红教授、强新教授、罗兵教授在试验完成过程中给 与的热情帮助和指导。 感谢广州达安基因有限公司的李振华朋友、泰安市中心医院的李莉莉 老师、郭辉主任在论文完成的过程中给与的无私帮助。 感谢我的爱人谢天自给与的支持和理解,

    解脲支原体MB抗原的分子生物学与分型

    Watson等l13]的实验发现,MB抗原是暴露于细胞外面的膜蛋百,是感 染中被识别的主要抗原,具有种的特异性,包含血清型特异和交叉反应的抗 原决定簇,对该抗原的研究可对疾病的发病机制和免疫机制起重要的作用。 解腺支原体的MB抗原与其它支原体的抗原一样,是支原体与宿主细胞发 生相互作用时的关键中介。MB抗原特性总结为以下几点:具有种的特异 性:包含血清型特异及交叉反应的两种抗原决定簇,可以被相应的单克隆 抗体所识别;在体内和体外均可制备;在体外有大小变异;在具有侵袭性 的支原体分离株中存在,并且具有大小差异(如从胎盘、脑组织和脑脊液 中分离出来的);是人类Uu感染中被识别的主要抗原。MB抗原的N端固 定于膜上,C端重复区暴露于微生物周围的微环境。N端可以作为其分群

    的基础;C端可以作为其分型的基础,C端最可能首先与宿主的防御系统 相遇而引起主要的抗体反应,是其致病机制和免疫机制的基础。

    水泥标准规范范本2.1MB抗原基因与解脉支原体分群、分型

    已有的对解脉支原体分群分型方法18,19特异性和敏感性均不尽人意, 且费时、费钱,对常规的诊断不实用,也不可靠。分子生物学的发展使解 腺支原体的分群、分型方法研究有了较大进展。近年来的研究主要利用

    2.2 MB抗原基因的变异

    1993年,Watson等[31.32]发现解豚支原体血清3型临床分离株的MB 抗原分子量明显小于标准株。1995年,Zheng等用PCR方法对不同临床分 离株MB抗原基因的分析发现,不同变异株中N端非重复区是保守的,C 端重复区是变化的,并与抗原的大小有关。一个抗原在遇到不同的微环境 时改变自已某一区域的大小,使其成为一个病原体并可能导致持续感染, 这也感染与免疫相互作用的结果。重复结构的变化引起蛋白质大小改变

    纺织标准3解脲支原体血清型与其致病性

    次为性滥人群、一般人群中的感染者,而健康人群最低:我国存在全部14 型Uu感染,并且存在未定型Uu;1型和4型与感染症联系密切,提示了 这二型Uu与感染的特异性联系,国外一些研究也报道类似结果185]。另外: 2、8、10型Uu与感染症也有一定关联,而3、9、14型阳性率健康人群与 感染人群(无论是否为STD)差异不显著,但在无感染症的性滥人群中却 很高,提示该三型Uu主要是寄居形式存在。Uu血清型的分布特征与性活 动有密切关系,性滥人群Uu混合型Uu感染率为25%左右,而健康人群 仅3.13%,说明了性伴侣多、性生活紊乱可造成多型别Uu共存,使感染 复杂化,国外也发现多伴侣者存在混合型别感染8),而且追踪的连续采样 检测可出现解豚支原体型别的变迁[87]。特别指出的是,在患STD性滥者中 未定型达15.38%,性溢人群中为7.22%,健康人群中无未定型解豚支原体。 未定型解腺支原体的流行病学意义值得作进一步的研究探讨。 总之,尽管人们为探讨不同血清型的解豚支原体的致病性进行了病原 体的分离、鉴定、血清抗体的检测,但都无足以令人信服的证据说明某中 血清型肯定与某种疾患有关,这可能与MB抗原基因的变异有关。许多资 料还缺乏可靠的对照组。但似乎可以这样认为:以1、4、6、8、14型和人

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