3.1.1在工作台上进行，涂布棒在每次使用之前应用酒精棉擦拭并用酒精灯灼烧，冷却后使用。 3.1.2制备后的土壤或沉积物稀释液进行培养皿接种，每个稀释度样品接种两个培养皿。 3.1.3用移液器吸取100μL相应稀释度的土壤或沉积物稀释液，注到培养皿中琼脂培养基上，用涂布 棒涂匀。 3.1.4取另一组培养皿不接种土壤或沉积物稀释液，接种无菌生理盐水，作为空白对照， 8.1.5对培养皿进行编号，记录样号、接种浓度、培养菌种，

3.2.1涂布接种完成后，将培养皿水平静置30min，之后将其倒置于充有甲烷或丁烷气体的 箱中，30℃恒温培养5d～7d，直至菌落数量稳定。 8.2.2MOB培养箱中甲烷浓度保持在10%左右，BOB培养箱中丁烷浓度保持在10%左右

2.1涂布接种完成后，将培养皿水平静置30min，之后将其倒置于充有甲烷或丁烷气体的密闭培 中，30℃恒温培养5d～7d，直至菌落数量稳定。 2.2MOB培养箱中甲烷浓度保持在10%左右，BOB培养箱中丁烷浓度保持在10%左右

8.3.1菌落培养结束后，统计每个培养皿上的菌落数。如果不能立即计数，应将培养皿存放于4℃冷 藏箱，且不应超过24h。 3.3.2进行培养血菌落计数时，直接采用菌落计数器进行计数。对所有稀释度样品进行计数，选择菌 落数在30～300个的稀释度样品进行菌落计算。 3.3.3在记下各培养皿的菌落数后，求出该稀释度下的培养皿平均菌落数。 8.3.4菌落数量按公式（2）、公式（3）计算

如果不能立么愈计数，特培养量存放于4 箱家具标准，且不应超过24h。 3.2进行培养血菌落计数时，直接采用菌落计数器进行计数。对所有稀释度样品进行计数，选择菌 数在30～300个的稀释度样品进行菌落计算。 3.3在记下各培养皿的菌落数后，求出该稀释度下的培养皿平均菌落数。 3.4菌落数量按公式（2）、公式（3）计算

每克干土中甲烷氧化菌数量=（甲烷氧化菌落平均数×稀释倍数）／干土所占百分比 .·（2 每克干土中丁烷氧化菌数量=（丁烷氧化菌落平均数×稀释倍数）／干土所占百分比 .（3)

培养皿出现菌落，则表明实验过程中有污染，本

A.1MOB培养基组成

中华人民共和国 石油天然气行业标准 近地表油气指示微生物检测方法 SY/T 7471—2020 石油工业出版社出版 （北京安定门外安华里二区一号楼） 北京中石油彩色印刷有限责任公司排版印刷 新华书店北京发行所发行 880×1230毫米16开本0.75印张17千字印1—400 2021年1月北京第1版2021年1月北京第1次印刷 书号：155021·8205定价：20.00元 版权专有不得翻印